我们知道,抗dsDNA抗体与系统性红斑狼疮(SLE)关系密切,通常被认为在SLE疾病进展中起着关键的作用,病情加重通常伴随着抗体滴度升高。其检测对诊断SLE,以及疾病的发展预后都有非常重要的意义。
脱氧核糖核酸(DNA)是生物个体遗传信息的携带者,见于所有的有核细胞。最早年在SLE患者血清中发现存在与DNA反应的成分,后来研究表明这些成分是抗体,称为抗DNA抗体。
抗原是DNA,DNA是由双链组成。分为单链DNA(ssDNA)和双链DNA(dsDNA)。由于抗dsDNA抗体临床意义更大,所以都使用它。
其检测有多种方法:目前最常用的方法是酶联免疫吸附实验(ELISAs)、采用绿绳短膜虫(CLIFT)基质的间接免疫荧光实验(IFT)、放射免疫实验(RIA,如Farr实验)。还有免疫印迹法(IBT)、多重PCR、阵列方法等。
因为各种方法各有优缺点,当看到抗dsDNA抗体的结果时,看看是什么方法检测的,对了解其意义是有帮助的。
酶联免疫吸附试验:SLE血清中的抗体可与来自动物、细菌、病毒、和植物的DNA抗原都会发生反应,DNA抗原来源于小牛胸腺、噬菌体(如PM2)、细菌(如大肠杆菌Escherichiacoli)以及各种质粒(如pUC18)。将DNA抗原包被于塑料微孔板上,加入血清后,使其在固相载体表面进行抗原抗体反应,洗涤除去液相中的游离成分,以后通过酶作用于底色后显色来判断结果。颜色反应的深浅与标本中相应抗体或抗原的量成正比。此种显色反应可以通过ELISA检测仪进行定量测定。这需要注意的,DNA易被蛋白质尤其是组蛋白污染,而检测时造成干扰,产生假阳性。
绿绳短膜虫间接免疫荧光实验(CLIFT):绿绳短膜虫是无脊椎动物的寄生虫,生活在节肢动物体内(通常是昆虫),形态呈多形性,特征形态为纺锤形,亦有一短的波动膜,膜的边缘有一条向前伸的鞭毛。里面有一条巨大的线粒体名为动基体,其中包含有未被蛋白质污染的dsDNA。应用它来作为DNA抗原,相对ELISAs特异性更高。CLIFT法的标准基质是只含有一个dsDNA而不含其他细胞核抗原的绿蝇短膜虫,具有高度特异性,是一种较好的确证方法。但结果判读受检测人员主观因素影响,且为半定量试验,不能灵敏地反映病情的变化,又需荧光显微镜等设备,医院普及。
放射免疫实验(RIA):抗原采用噬菌体DNA(如PM2)、或者质粒(如pUC18),分子大小介于kDa到了kDa,并且DNA必须是双链的。
抗DNA抗体对于SLE的检测敏感性和特异性依据检测方法和研究病患人群不同差异较大,下表是采用荟萃整理分析后的结果。
不同检测方法的敏感性和特异性
方法
特异性(%)
敏感性(%)
ELISA
71~97
44~79
FEIA
84~94
40~73
Farr
95~99
32~85
CLIFT
99~
13~47
注:FEIA:荧光酶免试验
可以看出CLIFT特异性最高,敏感性最低;ELISA的特异性最低,敏感性居中;Farr特异性较CLIFT稍低,但敏感性最高。
在对患者进行抗DNA抗体筛查时,需要应用高敏感性的方法,而后需要选择特异性高的方法进行复查确认。对已经确诊SLE进行随访监测时,可使用各种定量的检测方法。推荐使用Farr实验,主要是由于Farr实验可检测的抗DNA抗体与SLE,尤其是狼疮性肾炎患者病情恶化相关。
虽然抗dsDNA抗体与系统性红斑狼疮(SLE)关系密切,但其他临床综合征也发现该抗体,让人有点扑朔迷离的感觉。DNA作为抗原是如何呈递给T细胞的?在更仔细控制条件下,采用纯化的dsDNA基质,难以产生抗dsDNA抗体及其复合物。
最新的研究显示,核小体很可能是触发抗DNA抗体产生的抗原。
参考文献
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